1926年10月，正在河南省立第一工业学校读书的杨靖宇，根据党团组织的指示，回到确山从事农民运动。1927年4月4日，在中共驻马店特别支部、中共确山县支部和确山农民协会的领导下，杨靖宇组织数万农民武装，发动了著名的"确山暴动"，于4月7日晚攻克确山县城，活捉知县王少榘。暴动胜利后，在党组织的领导下，确山县首次各界人民代表大会民主选举产生了全国较早的完全代表农、工利益的县级农工革命政权——确山县临时治安委员会。
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由于杨靖宇经受了严峻的革命斗争考验，在领导确山农民暴动和组建河南省确山县革命政权中做出了重要贡献，1927年6月，中共驻马店特支决定由有关同志为已由团转党的杨靖宇正式履行入党手续，举行入党宣誓仪式。杨靖宇举手宣誓加入共产党之时，蒋介石已经发动反革命政变，正是对共产党人进行大逮捕、大屠杀的时候，也是党领导的大革命失败前夕。当时反革命气焰甚嚣尘上，白色恐怖遍布城乡。杨靖宇在此时加入中国共产党，说明他认准了党的主义的正确和他对党的忠诚。
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九一八事变后，杨靖宇任东北反日会会长，中共哈尔滨市委书记，中共满洲省委军委书记。1932年2月，中共满洲省委先后将张振国(张玉珩)、杨君武(杨佐青)、杨林等派往吉林磐石，帮助磐石中心县委筹建抗日武装。11月，杨靖宇以中共满洲省委巡视员身份巡视南满，出任南满游击队政委，统一思想，将游击队正式改编为中国工农红军第三十二军南满游击队(简称南满游击队或磐石游击队)。
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1933年8月15日，杨靖宇在磐石召开的南满游击区和红军南满游击队的代表会议上，依据省委指示精神，决定在积极开展反日游击战争中发展反日武装。1933年9月18日，即九一八事变两周年之际，中共磐石中心县委在磐石县北老末沟召集军民大会。宣布东北人民革命军第一军独立师正式成立。杨靖宇被一致推举为独立师司令。同时，发表了《东北人民革命军第一军第一独立师成立宣言 》。
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1933年10月27日，杨靖宇率东北人民革命军第一军独立师主力战略南下东边道地区，辗转来到金川河里。杨靖宇根据军需处长马占元提出的方案，决定以惠家沟为中心建立密营。1934年4月，杨靖宇率司令部撤离这里时，将部分指战员留下，进行密营建设。经留守部队的艰辛努力，在回头沟、水曲柳川、干沟子、惠家沟、板石沟、三岔子、黑瞎子沟、四方山、水洞沟等地建成了一些密营。指战员在游击区打完仗之后，撤到这里，进行修训。中共南满第二次代表大会和东南满党军领导干部会议在此召开，是中共南满省委、东北抗联第一路军诞生地和《东北抗联第一路军军歌》诞生地。
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1934年2月，杨靖宇贯彻《一·二六指示信》精神率领东北人民革命军（东北抗联前身）第一军独立师，在城墙砬子主持召开十七支抗日义勇军首领会议，成立了东北抗日联军总指挥部（区域性组织），杨靖宇当选为总指挥，掌握了总指挥部领导权，南满地区抗日民族统一战线就此形成。
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1936年1月13日，杨靖宇率300余名东北人民革命第一军直属部队赶着70多个马驮子，从英额布的小都岭来到张家街。当杨靖宇得知大泉源日军守备队去桓仁县拐磨子“讨伐”，守卫空虚，便指派两名村民去大泉源警察署谎称村内来了6、7名土匪，只有2支大把子和2支双筒子枪。日军古井和警察署长关增祥闻讯后，亲率守备队和自卫团钻进了早已经埋伏在张家街外马圈岭沟筒子里的口袋阵。近两个小时的激烈战斗后消灭了10名日本守备军。
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1936年2月27日，杨靖宇率领第一军直属部队袭击驻通化县热水河子伪军第二旅第七团团部。第七团正是铁杆汉奸邵本良团，战士们利用提前准备好的麻袋片、破衣服包住鞋，悄然无声地走过冰冻的浑江江面，突进敌军内部，活捉副团长杨凤武，俘获日满殖产会社的经理福岛力藏，伪税捐局主任，伪商务会长等，俘虏伪军60余人，缴获40多支三八式步枪，20多支自来得步枪，3万发子弹，大量布匹，胶鞋、军服等物资。而邵本良及日本指挥官因在别处开会而逃过一劫。
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热水河子战斗后，杨靖宇再次率领军部教导团南下到辑安县境开展游击活动。在辑安，为争取利用伪警察署、所分化敌人，曾亲自写信给头道崴子伪警察署长，做争取教育工作。杨靖宇从伪警察署长口中得到奉天第一军管区教导队骑兵一团团部要经过此地的消息，也得到军部秘书长韩仁和的证实。杨靖宇认真分析敌人动向并详细地观看地图后，决定在二道崴子沟口设伏袭击敌奉天教导队骑兵团。这次伏击伪满军奉天教导队骑兵团的战斗仅用15分钟。战斗中毙敌10余人，其中有日本教官1人，俘虏伪满军骑兵38人，缴获迫击炮1门、重机枪1挺、轻机枪2挺、三八式步枪42支、手枪18支、子弹2万发、战马30余匹、军用电话机1部、望远镜2个。此外，还缴获敌人部分文件。
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伪满军奉天第一军管区教导队骑兵团被杨靖宇所率部队缴械后，日本侵略者的忠实走狗邵本良率大批兵力，并由伪满军第一军管区参谋长满良和日本顾问武田乘飞机指挥，分数路追击杨靖宇所率部队。4月30日，杨靖宇率军部教导一团机枪连和一师三、六团，少年营进至与宽甸毗邻的地势较好的本溪县梨树甸子设下埋伏。此战第一军缴获步枪100多支，手枪20多支，无线电1台，迫击炮1门。邵本良脚被打伤，他到一老乡家抢来一套便服，换装逃走。梨树甸子战斗是东北人民革命军第一军成立以来，与敌人展开的最为激烈的战斗之一。
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邵本良在梨树甸子一战被第一军打坏一只脚，在奉天养好伤后，又带领部队妄图与杨靖宇所率部队较量。7月末，邵本良从奉天来到通化，数日后要路过热水河子，去八道江街驻防。杨靖宇得到情报，确定在地势险要，敌军必经之四道江与五道江之间的浑江大转弯处设伏打击敌人，夺取其所携辎重。此次战斗第一军共毙伤敌30余人，俘敌20余人，缴获轻机枪一挺、步枪五六十支和大车八九辆，以及军需物资粮食、军服、弹药等。
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1936年7月5日，杨靖宇和魏拯民共同主持召开了东南满党军领导干部会议（即“河里会议”）。魏拯民在会上进一步传达了共产国际“七大”会议精神和中共驻共产国际代表团关于撤销满洲省委、按四大游击区组成四个省委和组织建立东北抗日联军三个方面军（按后来实际组成吉东、北满、南满三个省委及抗联第一、一、三，三个路军）及选派学员去莫斯科学习等指示。会上，杨靖宇与魏拯民等详细讨论了东满、南满抗日斗争的形势和第一、二军的任务以及党的整个工作问题。将抗联第一、二军联合编成东北抗日联军第一路军，由杨靖宇任总司令兼政委、王德泰任副总司令、魏拯民任总政治部主任。同时规定了第一路军开展抗日游击战争的方针和任务，划分了第一路军所辖第一、二军各师活动区域。
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1935年秋季，日寇采取残酷的“集家归屯”政策，强行把住在山沟里的住户迁往“集团部落”，抗联与人民群众的联系被切断。1936年下半年，日寇集中兵力，对河里后方基地进行了疯狂的“围剿”，根据地遭到严重破坏。1937秋季以后，日寇对杨靖宇部发动了规模更大的“讨伐”和“围剿”，抗日游击区不断缩小，南满地区抗日游击战争进入最艰苦的时期。为了适应整个战局需要，必须建立新的抗日游击根据地。因此，杨靖宇率部队冲破敌人围困，离开桓仁老秃顶子抗日游击根据地，北上来到辑安老岭山区开展游击战争，并以老岭东岔一带为中心，建立了“老岭抗日游击根据地”。
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通辑铁路是梅河口至通化铁路延长线，全长120公里，与朝鲜平壤到满浦的铁路接轨，是日本帝国主义从朝鲜伸向中国腹地的一条重要通道。对这条铁路，日方日伪当局毫不隐讳地说：“通辑线的意义是重大的。从大陆经济政策和维持东边道治安的观点看，说它的重要性是其他的建设线路所无与伦比的，也不夸张。”抗联一路军奇袭老岭隧道工程战斗，使日伪当局损失巨大，也使即将竣工的老岭隧道工程被迫停工两个月。这一辉煌战绩，震动了整个东边道地区，引起了日伪统治者的恐慌，他们恐惧地称这次“老岭事件”，是“东边道肃正史上最巨大的一章”。
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1938年5月11日至6月1日，中共南满省委书记魏拯民和东北抗日联军第一路军总司令杨靖宇在辑安县老岭山区五道沟（今集安县榆林乡复兴村林场），共同组织召开了中共南满省委和抗联第一路军党军干部联席会议（史称“第一次老岭会议”）。第一次“老岭会议”，是中共南满省委召开的极为重要的一次会议。会议提出的在东、南满抗日游击战争中，保存实力，粉碎敌人全面进攻的策略方针，对统一全军思想，明确战斗任务起到方向性作用。同年7月，为应对程斌叛变造成的被动局面，魏拯民、杨靖宇等紧急召开了 “第二次老岭会议”，及时调整了军事部署，避免了日伪毁灭性的“围剿”，为东、南满抗日游击战争保存了有生力量，是扭转东、南满抗日游击战局的一次重要会议。
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在1936年内，杨靖宇组织抗联第一军主力部队以辽西、热河为目的地进行两次西征。第一次西征是在6月间由第一师部队进行的。第二次西征是在11月间由第三师部队进行的。组织西征是杨靖宇在指挥南满地区抗日游击战争中的重大军事战略部署，是一项具有战略意义的重要举措。但两次西征均未达到预期目的，并使部队遭到很大损失。
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1938年6月，被日军称为“满洲剿匪之花”的伪满军混成旅，被调来“讨伐”杨靖宇领导的抗联部队。因旅长名为索景清，也称为“索旅”。杨靖宇率领部队，采用半路伏击的游击战术，全歼了素有“满洲剿匪之花”之称的伪军索景清旅。这次战役打消了日本侵略者及日伪军的嚣张气焰，粉碎了他们企图剿灭抗联主力的阴谋。
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1939年9月下旬，杨靖宇率军部警卫旅、机关枪连、特卫排向桦甸县境转移至会全栈附近荞麦楞。9月30日，来到头道溜河口，与魏拯民等会合。为认清形势，明确今后斗争方针，杨靖宇提议召开一次会议，予以研究、确定。1939年10月，杨靖宇和魏拯民召开了“头道溜河会议”。根据这次会议确定的方针，抗联第一路军各部实行化整为零编成小股部队，分散活动，使抗日力量得以保存，并在长白山区坚持下来。
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1938年10月17日，第一路军总部警卫旅和少年铁血队400余人在临江县岔沟山区（今浑江市八道江区河口乡岔沟村），被日伪军“讨伐”队13个团约万余人铁壁合围。岔沟突围战极其激烈、凶险，是东北抗联斗争史上的一次著名战斗。此战，粉碎了敌人苦心经营20余天围攻抗联第一路军司令部及直属部队的计划，使我军转危为安。
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1939年9月，日伪当局在吉林市组成伪“吉林、通化、间岛三省日满军警联合作战司令部”，还组建了以叛徒为头目的挺进队。疯狂“讨伐”东北抗联一路军，战局急速恶化。1939年10月1日，杨靖宇和魏拯民共同主持召开中共南满省委和第一路军主要领导人会议，确定了“保存实力，化整为零，分散游击”的方针。1940年1月21日，司令部在濛江县马架子南上巴里同敌遭遇，警卫旅一团参谋长丁守龙负伤被俘叛变，把杨靖宇逼入绝境。2月1日，司令部特卫排长张秀峰投敌，进一步暴露了杨靖宇的行踪。1940年2月15日，讨伐队发现了杨靖宇的行踪。1940年2月23日，杨靖宇将军在吉林省濛江县（今靖宇县）只身与敌周旋5昼夜后，最终壮烈牺牲，年仅35岁。杨靖宇将军牺牲后，日军无法理解他为何能在冰天雪地里长时间被围困，且在断绝粮食的情况下顽强战斗。日军将他割头剖腹，发现他的胃里除了没消化的树皮、草根和棉絮，竟没有一粒粮食，在场的日军无不为之震惊。
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